CTPF : Une plateforme de Thermal Shift Assay à l’ICSN
La plateforme CTPF « Criblage de Thermostabilité des Protéines par Fluorescence » ou « Protein Thermal Shift Assay » est une plateforme ouverte aux académiques et aux industriels pour des activités de prestations ou de collaborations sur des projets de recherche.
La technique du Thermal Shift Assay (TSA) permet de mesurer la variation de la température de dénaturation d’un échantillon protéique, en fonction des conditions expérimentales, lors d’un gradient rapide de température. Le colorant fluorescent, Sypro Orange, est utilisé pour mesurer l’exposition des régions hydrophobes de la protéine lors de sa déstructuration.
Applications du TSA
La qualité des préparations de protéine et le rendement des purifications étant essentiels pour le développement des études biochimiques et structurales des protéines, la plateforme CTPF peut apporter très rapidement des informations essentielles pour leur caractérisation, par étude de leur profil de dénaturation.
Les principales applications de cette technique sont d’améliorer la purification des protéines, de comparer la stabilité de protéines mutantes, de mesurer l’interaction avec des substrats, mais aussi la recherche et le criblage de ligands d’intérêt. Les développements plus récents nous permettent également maintenant d’étudier sur la plateforme des assemblages plus complexes comme des particules virales.
Les expériences de criblage sont réalisées sur des appareils de QPCR qui permettent de cribler 96 ou 384 conditions en 20 à 60 min. Chaque courbe de dénaturation est obtenue dans des volumes de 5 à 20 µl en utilisant généralement 1 à 3 µg de protéine par réaction. La plateforme dispose de différents types de machines de QPCR et d’un robot de pipetage pour la préparation des mélanges réactionnels.
Infrastructure et Réseaux
ICSN – CNRS :
La plateforme dépend de l’Institut de Chimie des Substances Naturelles sur le site CNRS de Gif-sur-Yvette. Les locaux de la plateforme sont situés au 1er étage du Bâtiment 21 sur le campus.
PARIS-SACLAY :
La plateforme est référencée sur le site Plug in Labs des Plateformes de l’Université Paris-Saclay.
IBiSA :
La plateforme a obtenu la labellisation IBiSA en 2018 dans le cadre de la constitution de la plateforme Criblage@ParisSaclay (C@PS), en s’associant avec les plateformes CCCHD (CEA), CIBI (ICSN-CNRS) et CIBLOT (Université Paris-Sud).
